本文摘要：CRISPR／Cas9系统是一种十分高效的基因编辑方法，但是大部分被基因编辑过的动物都有集合体性，也就是说它们只有一部分细胞的基因再次发生了编辑。对于牵涉到表型的研究而言，集合体的基因编辑动物必须更进一步地杂交育种，才能获得几乎的基因敲除动物。当牵涉到大型动物，比方说非人灵长类时，嵌合体的问题就不会变得最为相当严重，因为猕猴的交配周期长约5－6年而且每胎只生子一个幼崽。 之前有许多研究者都企图一步法来产生没集合体的基因修饰动物，特别是在是大型动物。

CRISPR／Cas9系统是一种十分高效的基因编辑方法，但是大部分被基因编辑过的动物都有集合体性，也就是说它们只有一部分细胞的基因再次发生了编辑。对于牵涉到表型的研究而言，集合体的基因编辑动物必须更进一步地杂交育种，才能获得几乎的基因敲除动物。当牵涉到大型动物，比方说非人灵长类时，嵌合体的问题就不会变得最为相当严重，因为猕猴的交配周期长约5－6年而且每胎只生子一个幼崽。

之前有许多研究者都企图一步法来产生没集合体的基因修饰动物，特别是在是大型动物。还包括将Cas9mRNA和sgRNA静脉注射到卵母细胞中而非受精卵中，或静脉注射Cas9蛋白，或静脉注射双sgRNA。但是DNA测序分析了这些方法的动物个体的组织后，找到这些方法几乎做双等位基因敲除的效率非常较低。

6月6日，《细胞研究》在线公开发表了一项成果，应用于改良的“C－CRISPR”技术可以取得单基因或多基因功能几乎敲除的小鼠及猴。该研究通过将多个针对基因外显子的倒数指导RNA（sgRNA）静脉注射到受精卵中，可以高通量制作各种基因几乎敲除小鼠并用作表型分析，并较慢制作基因敲除猴模型。这项研究由中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创意中心的杨辉研究组、熊志奇研究组以及神经所苏州非人灵长类研究平台孙强团队合作已完成。

该项研究中，研究者找到向受精卵当中静脉注射Cas9mRNA和多个sgRNA的鸡尾酒式混合物，单个或多个基因在小鼠胚胎能做100％的几乎移除，以及猴子胚胎中91％－100％的移除。这种方法能同时产生放入缺陷和外显子移除，从而构建高效的基因几乎敲除。研究者还应用于C－CRISPR法创建基因功能几乎敲除的F0代小鼠，用作基因功能的较慢表型分析，以及取得基因功能几乎敲除的F0代猴。最后，通过高通量测序分析表明，C－CRISPR在基因编辑过的小鼠和猴子中会引进显著的脱靶转变。

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